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DAPT

(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯

品牌
J&K
CAS
208255-80-5
货号
286160
规格纯度
98%, 一种γ-secretase 抑制剂
参考价格
714 *本价格含增值税费
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数量
-+
产品介绍:

基本信息

分子式C23H26F2N2O4
分子量432.46
MDL编码MFCD04974585
Beilstein9588440
存储条件Freezer -20℃

产品描述

DAPT (GSI-IX)是一种新型γ-secretase抑制剂,抑制 Aβ产生,在HEK 293细胞中IC50为20 nM。

靶点(IC50 & Targe)

γ secretase(Aβ),20nM

Aβ,115 nM (in human primary neuronal cultures)

Aβ42,200 nM (in human primary neuronal cultures)

体外研究

DAPT功能性抑制γ-分泌酶而降低HEK 293细胞中全部Aβ产量,IC50为20 nM。DAPT作用于原代培养的人神经细胞,也抑制Aβ产量,作用于全部Aβ和Aβ42时, IC50分别为115 nM和200 nM,比作用于HEK 293细胞时低5-10倍。最新研究显示DAPT 抑制SK-MES-1 细胞增殖,这种作用存在浓度依赖性,IC50为11.265 μM。此外, DAPT作用于肺鳞状细胞癌细胞,通过抑制Notch受体信号通路,也诱导依赖型和非依赖型细胞凋亡。[1]

体内研究

DAPT按100mg/kg剂量处理PDAPP小鼠,产生强劲和持久的药效,1小时内脑中 DAPT水平超过100 ng/g ,且处理后,持续上升达18小时,3小时后的时候观察到最高水平为490 ng/g。在此期间, DAPT 按100 mg/kg剂量处理,也降低大脑皮层全部Aβ和Aβ42,这种作用存在剂量依赖性,降低50%。[1] DAPT按40 mg/kg剂量作用于大鼠大脑皮层, 抑制LPS诱导的γ分泌酶活性,且提高携带长期神经炎症的细胞凋亡。[3]

激酶实验

体外Aβ减少检测实验 :

转染APP751(HEK 293)基因的人类胚胎肾细胞,用于常规 Aβ减少检测。细胞接种在96孔板上,在含10%热灭活胎牛血清的DMEM培养基上粘附过夜。 DAPT 在 DMSO中稀释,终浓度为0.1% DMSO。使用DAPT在37oC下预处理细胞2小时,吸除培养基,使用新鲜实验化合物溶液。再处理2小时后,抽除条件培养基,使用标准 ELISA(266-3D6)分析全部Aβ。根据使用 0.1% DMSO 处理的对照组细胞,测量Aβ产量的减少,表示为抑制百分数。实验至少按6种剂量重复进行,得到实验数据,然后使用XLfit软件拟合四参数方程,测定 药性。培养的人和PDAPP小鼠神经细胞在无血清培养基上生长,增强他们的神经元特性,其中有90%以上神经元在实验使用前成熟。通过在每孔中加入新鲜培养基,然后在没有DAPT存在时,在37oC下温育24小时,收集条件培养基中得到的基底Aβ值。使用含DAPT的新鲜培养基,按所需浓度范围在37oC下再处理培养细胞24小时,收集条件培养基。为了测量全部Aβ,使用与HE2K 293细胞实验 相同的ELISA(266-3D6) 分析样本。通过分开的ELISA(21F12-3D6),使用特定Aβ42 C-端捕获抗体,进行Aβ42 产量分析。测定对全部Aβ和Aβ42产量的抑制情况。绘制与DAPT浓度相对的抑制百分数,使用 XLfit 软件分析数据,测定药性。

细胞实验

Cell lines: SK-MES-1

Concentrations: 2.5 μM到 160 μM

Incubation Time: 72小时

Method: 细胞接种在96孔板上,使用0.1% DMSO或 DAPT(浓度为2.5 μM-160 μM )处理72小时。使用MTT染料减少检测实验,稍微修正,测定细胞毒性。与DAPT温育后, 20 μL MTT溶液 (5 mg/mL,溶于 PBS)加到含 180 μL培养基的每孔中,实验板在37 oC下温育4小时,随后每孔加入150 μL DMSO,在室温下震荡15分钟混合。通过酶联免疫吸附法在490 nm处测定吸光值。使用α-MEM 及等量的MTT 溶液和溶剂,作为空白对照。使用PROBIT 程序在SPSS中计算IC50值。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 过表达淀粉样前体蛋白APPV717F 突变型的杂合PDAPP转基因小鼠

Formulation: DAPT溶于玉米油, 5% (v/v) 乙醇中

Dosages: ≤100 mg/kg

Administration: 口服处理

(Only for Reference)

参考文献

[1] Dovey HF, et al. J Neurochem. 2001, 76(1), 173-181.

[2] Cao H, et al. APMIS. 2012, 120(6), 441-450.

[3] Nasoohi S, et al. Neuroscience. 2012, 210, 99-109.

安全信息

防范说明P262
WGK3

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