基本信息
分子式 | C25H24N4O2 |
分子量 | 412.48 |
存储条件 | Freezer -20℃ |
产品描述
BIX 02188是一种选择性的MEK5抑制剂,IC50为4.3 nM,也抑制ERK5催化活性,IC50为810 nM,且不抑制与其密切相关的激酶MEK1, MEK2, ERK2,和JNK2。
靶点(IC50 & Targe)
ERK5,810nM
MEK1,>6.3μM
MEK2,>6.3μM
MEK5,4.3nM
TGFβR1,1.8μM
体外研究
BIX02188明显抑制MEK5催化活性,IC50为4.3 nM, 轻微抑制ERK5催化活性,IC50为0.83 μM,作用于关系密切的激酶MEK1,MEK2,ERK1,p38α,JNK2,TGFβR1,EGFR,和STK16没有活性,作用于TGFβR1时IC50为1.8 μM,作用于p38α时IC50为3.9 μM,作用于其他激酶IC50值都大于6.3 μM。用BIX02188预处理HeLa细胞,抑制山梨醇诱导的ERK5磷酸化,这种作用存在剂量依赖性,但是不会抑制ERK1/2,p38,和JNK1/2 MAPKs磷酸化。BIX02188单独处理HeLa或HEK293细胞24小时,没有毒性。 BIX02188作用于HeLa和HEK293细胞,通过在持续激活的MEK5/ERK5/MEF2C驱动的萤光素酶表达系统中的MEK5/ERK5信号级联反应抑制MEF2C转录激活,IC50分别为 1.15 μM 和0.82 μM。[1] BIX02188作用于 300 μM H2O2刺激的牛肺微血管内皮细胞(BLMECs),抑制BMK1磷酸化,这种作用存在剂量依赖性,IC50为0.8 μM, 尤其通过抑制MEK5 信号通路。[2]
激酶实验
催化实验:
使用PKLight ATP检测试剂,及从杆状病毒表达系统中分离MEK5蛋白用于测定激酶活性。使用15 nM GST-MEK5和0.75 μM ATP,及含25 mM Hepes,pH 7.5,10 mM MgCl2, 50 mM KCl, 0.2% BSA, 0.01% CHAPS, 100 μM Na3VO4, 0.5 mM DTT, 和 1% DMSO 的实验buffer,及有不同浓度BIX02188存在时进行反应。激酶反应混合物在室温下温育90分钟,随后加入10 μL ATP检测试剂反应15分钟。测定相对光单位(RLU)信号,然后转换RLU信号成对照组百分数(POC),用于测定IC50值。
细胞实验
Cell lines: HeLa细胞
Concentrations: 溶于DMSO, 终浓度为10 μM 左右
Incubation Time: 预处理1.5小时
Method: 细胞血清饥饿20小时,然后用终浓度为0.4 M的山梨醇在37oC下刺激20分钟。加入山梨醇,1.5小时后,加入BIX02188。获得细胞,溶于50 μL含Hal蛋白酶和磷酸抑制剂的RIPA buffer 中,在4oC下进行5-10分钟。溶解产物按14,000 rpm转速离心10分钟,50 μL溶解物加到50 μl 2×样本buffer中,然后在95oC下进行4分钟20 μL样本在SDS-PAGE 10% Tris-glycine gels中跑胶,然后转移到硝化纤维素上。使用合适抗体进行Western blotting。
(Only for Reference)
参考文献
[1] Tatake RJ, et al. Biochem Biophys Res Commun, 2008, 377(1), 120-125.
[2] Li L, et al. Biochem Biophys Res Commun, 2008, 370(1), 159
安全信息
图形或危害标志 | |
危险说明 | H302 H400 |
防范说明 | P273 |
UN号码 | 3077 |
危险分类 | 9 |
包装等级 | III |