探针法维容氏支原体实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma wenyonii

货号：Mqt-wen-20      规格：20个反应

货号：Mqt-wen-50      规格：50个反应

货号：Mqt-wen-100     规格：100个反应

储存：-20度，避光保存，保质期一年。避免反复冻融。

试剂盒特点：

1，    特异性检测维容氏支原体，准备样品时注意不要污染其他动物血制品。

2，    灵敏度高，反应液中仅1个基因组时检出率为58%。线性范围跨越8个数量级。

3，    使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力强和热稳定性好的特点；采用热启动方式，可抑制非特异性扩增，降低背景荧光。

4，    带有阳性对照样品，可用于检验试剂盒有效性。

5，    带有dUTP和UDG酶，可降低残留DNA的污染。

维容氏支原体（Mycoplasma wenyonii），旧称维容氏附红细胞体（Eperythrozoon wenyonii），也有称为牛嗜血支原体、牛附红细胞体、温氏支原体、文氏支原体、温氏附红细胞体、维氏附红细胞体、温氏血虫体、文氏附红血球体，维容氏支原体主要依赖宿主红细胞内的营养物质生存，自身代谢能力极为有限。由于缺乏完整的三羧酸循环（TCA循环）和氧化磷酸化途径，其能量代谢主要依赖糖酵解途径，通过底物水平磷酸化生成ATP。与寄生生活相适应，该病原体可能通过特定的转运系统直接从宿主获取能量和营养，例如通过ATP/ADP转运蛋白利用宿主的ATP。与大多数支原体类似，维容氏支原体无法自主合成多种必需氨基酸、核苷酸和脂类，必须从宿主细胞中摄取这些物质以满足生长需求。此外，其缺乏合成血红素的途径，因此依赖宿主的血红蛋白降解产物作为铁源。这种高度依赖宿主的代谢模式导致维容氏支原体难以在无细胞培养基中生长，也限制了针对其代谢途径的药物开发。在感染过程中，维容氏支原体的代谢活动可能对宿主红细胞造成损伤，如改变细胞膜稳定性、诱导氧化应激，并最终导致溶血性贫血。

维容氏支原体尚无合适的体外培养方法，因此难以开发蛋白类检测方法。检测方法一般采用吉姆萨染色的血涂片法。血涂片法的检测灵敏度和特异性均比较差，容易受到人工制片方法和血液里其他成分（如：Howell–Jolly体）的干扰，且支原体易从红细胞表面脱落，造成漏检。而PCR法在灵敏度上则有明显的优势，且可以区分支原体种类。定量PCR法与普通PCR法相比，不仅可以进行定量分析，而且操作更为方便，更少受环境污染的影响。

维容氏支原体的检测方法随着技术的发展而不断演进，目前主要依赖形态学观察、血清学检测和分子生物学技术等多种手段。传统的显微镜检测是最基础的诊断方法，通常采用吉姆萨染色或吖啶橙染色对血液涂片进行观察，在油镜下寻找附着在红细胞表面或游离于血浆中的病原体。这种方法操作简便、成本低廉，但灵敏度较低，在感染早期或低水平感染时容易出现假阴性结果。此外，由于维容氏支原体与其他血源性支原体（如Mycoplasma haemobos）形态相似，仅凭显微镜观察难以准确区分。

血清学检测方法主要包括间接免疫荧光试验（IFA）和酶联免疫吸附试验（ELISA），通过检测动物血清中的特异性抗体来判断感染状况。这类方法适用于群体筛查和流行病学调查，能够反映动物群体的感染历史和免疫状态。然而，由于抗体产生需要一定时间，在急性感染早期可能出现窗口期，导致假阴性结果。同时，抗体检测无法区分现症感染和既往感染，且不同支原体之间可能存在交叉反应，影响检测的特异性。

分子生物学技术已成为当前最可靠的诊断手段，特别是基于PCR技术的检测方法。常规PCR、实时荧光定量PCR（qPCR）和环介导等温扩增（LAMP）等方法通过扩增维容氏支原体的特异性基因序列来实现高灵敏度、高特异性的检测。其中，qPCR技术不仅能定性检测，还能通过Ct值对病原体载量进行定量分析。

探针法维容氏支原体实时定量PCR试剂盒基于16S rRNA基因设计特异性引物和探针，可以准确识别维容氏支原体，经BLAST验证，与羊支原体（Mycoplasma ovis）、猪支原体（Mycoplasma suis）、以及寄生于梅花鹿的Candidatus Mycoplasma haemocervae和Candidatus Mycoplasma erythrocervae有交叉反应，而与Candidatus Mycoplasma haemobos及其他生物的基因组无交叉反应。由于嗜血支原体对宿主有严格的特异性，检测时只需注意严格操作，不污染其他动物的血源，就不会对检测造成干扰。本试剂盒适用于维容氏支原体的检测。

本产品仅供研究使用。不可用于临床诊断。