产品及特点

新生隐球菌(Cryptococcusneoformans)是深部感染真菌中隐球菌属的主要菌种之一，种类较多，广泛分布于自然界，例如受动物污染的土壤，检出率较高。由于肿瘤及化疗药物的使用、艾滋病的流行、移植术后免疫抑制药物的使用等原因，新生隐球菌的发病率越来越高，在国外已成为艾滋病患者常见的并发症之一，也是导致患者死亡的重要原因，在我国新生隐球菌的发病率也呈逐年增加的趋势，因此快速检测新生隐球菌具有重要意义。本产品是根据 PCR原理开发检测新生隐球菌的试剂盒，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供 DNA模板。

2、引物经过精心优化，专一性强，只扩增新生隐球菌，与其他微生物没有交叉反应。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、PCR  mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR  50次，但只能用于科研。

规格及成分

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备1、用自选方法纯化 N+2个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

2、如果有 N个样品，则需要做 N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是新生隐球菌 PCR阳性对照的10000倍稀释液，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA放冰上待用。

二、设置 PCR反应(40μL体系)

3、对 N+2个样品，在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照，故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分：

4、按下表设置 PCR反应：

三、电泳检测

5、取 10-20  μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本产品提供的 PCR  Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR产物阳性对照必须有124bp片段大小条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。