产品及特点

鲁氏耶尔森菌(Yersinia ruckeri)是革兰氏阴性肠杆菌，可感染多种鱼类，鲑科鱼类影响特别明显，是造成鲑科鱼类肠炎红嘴病(enteric  redmouth diseases，ERM)的主要病原菌。被感染的鱼可以观察到异常的行为变化，包括在水面附近游动、食欲不振和异常游动(如竖游、旋游、倒游等)；患病鱼还表现出其他体征如：眼球突出、皮肤变黑、口腔和咽喉及其周围皮下出血、肛门红肿有异物流出等。鲁氏耶尔森菌侵染初期出现患病典型症状的鱼较少，感染后短时间内疾病大规模暴发，死亡严重。本产品是根据 PCR原理开发的鲁氏耶尔森菌检测试剂盒，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供 DNA模板。

2、引物经过精心优化，专一性强，只扩鲁氏耶尔森菌，与其他病原没有交叉反应。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、 PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次，但只能用于科研。

规格及成分

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、用自选方法纯化 N+2个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

2、如果有 N个样品，则需要做 N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL鲁氏耶尔森菌 PCR阳性对照的 10000倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA放冰上待用。

二、设置 PCR反应(40μL体系)

3、对 N+2个样品，在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照，故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分：

4、按下表设置 PCR反应：

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物。2%琼脂糖凝胶电泳检测  PCR产物。本产品提供的 PCR  Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有 192bp大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。