产品及特点

蓝舌病病毒(Bluetongue  Virus，BTV)会引起蓝舌病，是反刍动物的一种严重传染病。以口腔、鼻腔和胃肠道黏膜发生溃疡性炎症变化为特征，病羊乳房和蹄部也常出现病变，且常因蹄真皮层遭受侵害而发生跛行，该病毒主要侵害绵羊，对养羊业造成严重损害，因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。为此本公司基于 RT-PCR原理开发了本产品，可用于在科研领域快速定量检测蓝舌病病毒。它具有下列特点：

1、一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2、根据蓝舌病病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3、灵敏度可以达到 1000拷贝/反应。

4、使用一管式 RT-PCR技术，RT和 PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5、本产品足够 50次 20μL体系的 RT-PCR。

6、本产品参考国标 GB/T18636-2017开发，只能用于科研，不能用于临床。

规格及成分

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为 12个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂

样品 RNA

使用方法

一、样品 RNA的制备

1、如果有 N个样品，必须设置 N+2个提取，多出的一个是 PC(样品制备阳性对照)，一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL蓝舌病病毒 PCR阳性对照的 10000倍稀释的(稀释后浓度为 1×10⁴拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝，可以将 10μL原液加入到 990μL自备 TE溶液中，充分混匀，此为 100倍稀释液。再取 10μL此稀释液加入到 990μL自备 TE溶液中，充分

混匀，此为 10000倍稀释液)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2、用自选方法纯化 N+2个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20次核酸释放剂试用装。

二、设置 RT-PCR反应(20μL体系)

3、如果有 N+2个样品，则标记 N+4个 PCR管(额外增加的两个管一个是 RT-PCR阳性对照，另一个是 RT-PCR阴性对照)并按照下表在 PCR管中加入下列成分：

4、上机进行 RT-PCR，RT-PCR反应参数为:

5、琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为 273bp。如果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。