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可溶性果胶(SP)检测试剂盒(咔唑微板法)
产品介绍

   天然果胶类物质以原果胶、果胶(Pectin)、果胶酸的形态广泛存在于植物的果实、根、茎、叶中,是细胞壁的一种组成成分,它们伴随纤维素而存在,构成相邻细胞中间层粘结物,使植物组织细胞紧紧黏结在一起。原果胶是不溶于水的物质,但可在酸、碱、盐等化学试剂及酶的作用下,加水分解转变成水溶性果胶。果胶(Pectin)又称多聚半乳糖醛酸,是由 D-半乳糖醛酸以α-1,4糖苷键连接形成的直链状聚合物,本质上是一种线形的多糖聚合物,含有数百至约 1000个脱水半乳糖醛酸残基,其相应的平均相对分子质量为 50000~150000。

   可溶性果胶(SP)检测试剂盒(咔唑微板法)检测原理是果胶物质水解生成半乳糖醛酸,后者在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物,该化合物呈色强度与半乳糖醛酸浓度成正比,该化合物颜色在反应 1~2h内呈色最深,当反应液颜色最深时在波长 530nm处测定吸光度,通过与标准曲线比较,计算出样品中可溶性果胶含量。该试剂盒主要用于定量检测植物组织或果实中可溶性果胶含量,该 50T试剂盒可以检测 50~60个样品。该产品仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成:

试剂(A):半乳糖醛酸标准(1mg/ml)1ml4℃避光
试剂(B): SP Lysis buffer4×250mlRT
试剂(C): SP Assay buffer1ml4℃避光
使用说明书1份

自备材料:

1、蒸馏水、浓硫酸

2、实验材料:桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织

3、研钵或匀浆、96孔板、酶标仪

4、离心管或试管、离心机、水浴锅

操作步骤(仅供参考):

1、可溶性果胶提取:

①取果实或其他植物组织,洗净,擦干,称取剪碎的新鲜样品 0.1g,置于研钵或匀浆器。

②加入 1ml SP Lysis buffer,充分研磨或匀浆后转入 5ml离心管或试管中,用 SP Lysis buffer冲洗研钵或匀浆器并转移至离心管或试管中,补加 SP Lysis buffer至 5ml。

③沸水浴 30min,在煮沸过程中及时补加 SP Lysis buffer至 5ml,取出冷却至室温,8000r/min离心 15min,弃上清;重复该步骤 2次,以去除样品中的糖分及其他物质。

④取含有沉淀的试管,加入 2ml蒸馏水,50℃水浴 30min以溶解果胶,取出冷却至室温,8000r/min离心 15min,将上清液转移至新离心管或试管中,用少量蒸馏水洗涤沉淀,8000r/min再次离心 15min,一并将上清液转移至上述新离心管或试管中,加蒸馏水定容至 5ml,即为可溶性果胶提取液。

2、稀释半乳糖醛酸标准溶液:取适量的半乳糖醛酸标准(1mg/ml)用蒸馏水稀释至 100μg/ml,然后再按下表进行梯度稀释:

加入物(μl)12345
半乳糖醛酸标准(100μg/ml)4080120160200
蒸馏水16012080400
半乳糖醛酸浓度(μg/ml)20406080100

3、加样:按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡,小心混匀。如果样品中的果胶浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测**能设置 2~3平行管,求平均值。

加入物(ml)空白管标准管测定管
蒸馏水0.2
系列半乳糖醛酸标准(1~5号管)0.2
可溶性果胶提取液0.2
浓硫酸(沿管壁小心加入)1.21.21.2
加盖或塞沸水浴 20min,迅速冷却至室温。

注意:浓硫酸具有强腐蚀性,应小心操作,沿管壁缓慢加入。

4、测定:取上述空白管、标准管、测定管中溶液各 280μl,加至 96孔板的孔中,加入 8μ l SP Assay buffer,避光静置 0.5~2h,当显色最深时以酶标仪测定系列标准孔、测定孔在 530nm处吸光度(以空白调零)。

计算:

以 1~5号管系列半乳糖醛酸标准(20、40、60、80、100μg/ml)为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,直接计算直线回归方程。

组织样品的可溶性果胶含量(μg/g)=(c×N×VT}/W

液体样品的可溶性果胶浓度(μg/ml)=c×N

组织样品的可溶性果胶含量(%)=(c×N×VT}/(W×106) ×100%

式中:c=根据标准曲线求得的测定管半乳糖醛酸浓度  (μg/ml)

VT=可溶性果胶提取液总体积(ml)=5

W=样品鲜重(g) N=稀释倍数

注意事项:

1、浓硫酸具有强腐蚀性,应小心操作,沿管壁缓慢加入。

2、取样量、试剂用量应根据果胶含量适当调整。

3、可溶性糖对测定结果有较大影响,应彻底去除样品中的可溶性糖。

4、SP Assay buffer应密闭避光保存,避免有效成分挥发,其反应时间根据具体情况而定。

5、如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但应考虑分光光度计的最小检测体积。

6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:6个月有效。4℃运输,4℃保存。

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