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土壤亚硝酸还原酶(S-NiR)测试盒(可见分光光度法)
货号:SNIR-2-G
包装:50管/24样


产品介绍

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶之一,参与亚硝酸盐至 NO的还原反应,它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率,为氮素转化规律的研究提供一定的依据。

测定原理

亚硝酸还原酶可将 NO2-还原为 NO,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的 NO2-减少,即 540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。

需自备的仪器和用品

天平、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1ml玻璃比色皿。

试剂的组成和配制

试剂一:液体 10ml×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加 10ml蒸馏水溶解。

试剂三:液体 10ml×1瓶,4℃保存。(如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解)

试剂四:液体 25ml×1瓶,4℃避光保存。(如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解)

试剂五:液体 25ml×1瓶,4℃避光保存。

工作液:临用前根据用量将试剂四和试剂五以 1:1的比例混合。

样品处理

新鲜土样自然风干或 37度烘箱风干,过 30~50目筛。

测定操作表


空白管对照管测定管
风干土样(g)
0.10.1
蒸馏水(μL)
200
试剂一(μL)200
200
试剂二(μL)200200200
混匀后,25℃反应 1h
试剂三(μL)200200200
充分震荡 30S,10000rpm,4℃,离心 10min
上清液(μL)500500500
工作液(μL)100010001000
充分混匀,用蒸馏水调零,立即于 1ml玻璃比色皿中测定 540nm各管吸光值,分别记为 A空白管、A对照管、A测定管。

计算公式

标准曲线:y = 1.5562x+ 0.0088,R2 = 0.996;x为标准品浓度(μmol/ml),y为吸光值(A标准管-A空白管)。

酶活单位定义:每 g土样每天还原 1μmol NO2-的量为一个酶活力单位。

S-NiR(μmol/d/g土样)=[A空白管-(A测定管-A对照管) -0.0088] ×V标÷1.5562÷W÷T= 3.084×[A空白管-(A测定管-A对照管) -0.0088]÷W

T:反应时间,1h=1/24d;V标:标准液体积,0.2ml; W:样本质量,g。

注意事项

1.配制好的工作液 3天内使用完。

2.若吸光值超过 3,将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色,并在计算公式中乘以稀释倍数。

3.严格控制显色时间,否则会对结果有影响。

4.标准曲线线性范围为 0.03μmol/ml-1.5μmol/ml。

5.A空白管-(A测定管-A对照管)线性范围为 0.02-3。

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