正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

黄酮醇广泛存在于各种植物中，具有很强的抗氧化和清除自由基能力，国内外已对其生理功能或药理做了大量研究。

测定原理：

在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下,黄酮醇与铝盐生成螯合物,加入氢氧化钠溶液后显红橙色，在 510nm 处有最大吸光值。

需自备的仪器和用品：

酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔酶标板、研钵、冰、蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：液体 60 mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 2 mL×1 管，4℃保存；

试剂三：液体 2 mL×1 管，4℃保存；

试剂四：液体 12 mL×1 瓶，4℃保存。

黄酮醇的提取：

1. 组织：按照组织质量(g)：蒸馏水体积(mL)为 1：5～10 的比例(建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一)，进行匀浆，超声提取 30min，8000g，25℃离心 10min，取上清待测。

2. 血清(浆)等液体样品：直接测定。

测定步骤：

1. 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 510nm。

2. 样本测定

按下表在 EP 管中加入如下试剂

取 200μL 转移至 96 孔板中，于 510nm 处分别读取测定管和对照管吸光值，分别记为 A 测定和 A 对照，计算△A=A 测定-A 对照。每个测定管设一个对照管。

黄酮醇含量计算：

标准条件下测定回归方程为 y = 1.5272x - 0.01   R² = 0.9994；

x 为芦丁含量(mg/mL)，y 为吸光值差值△A。

1. 按照血清(浆)体积计算

黄酮醇含量(mg/mL)= (△A+0.01)÷1.5272=0.65×(△A+0.01)

2. 按照样品质量计算

黄酮醇含量(mg/g 鲜重)= [ (△A+0.01)÷1.5272×V1]÷(W ×V1÷V2)= 0.65×(△A+0.01)÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.1 mL；V2：加入提取液体积，1 mL； W：样本质量，g；