钙螯合剂BAPTA, AM
产品名称 BAPTA, AM 产品介绍
BAPTA, AM是一种细胞内钙离子选择性螯合剂。它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成BAPTA,从而被滞留在细胞内。BAPTA基本的螯合单位和EDTA类似,只是两个脂肪氮被芳香氮所替代。因此,BAPTA在生理pH下不会被质子化。BAPTA的pKa3为5.47,pKa4为6.36。这个特点显示了去质子化的步骤并不包含在钙的螯合步骤中。由于不受质子的干扰,它的螯合率比EGTA高很多。 使用方法 (1) 溶解方法 将25mg BAPTA, AM加入到 654μL无水DMSO中,配制50 mM stock solution。 保存stock solution的方法和保存时间*: A、由于AM体遇水容易分解,所以我们推荐现配现用。 B、使用无水DMSO,在冷冻的条件下,可以保存约1~2个月。 (2) 使用方法 稀释stock solution,添加细胞。 稀释浓度:少的 6~8 μM,多的50 μM * 由于BAPTA, AM是非水溶性,稀释时先再添加DMSO后,添加水溶液(特别是使用培养液时)。不然的话,BAPTA, AM的结晶有可能出来。关于添加的DMSO的量,考虑细胞的毒性,应该低于1%以下。 * 由于BAPTA, AM是非水溶性,所以稀释时慢慢添加水溶液。 * 如果不想再添加DMSO的话,也有添加Pluoronic F127的方法。添加Pluoronic F127时,先添加到母液后,使用PBS等水溶液稀释。 * stock solution和PBS等水溶液混合时,将stock solution添加到PBS等水溶液里。 例1) 10 μM,使用2 μL 50 mM BAPTA, AM stock solution 再添加的DMSO量:0μL(DMSO最终浓度:0.02 %) 添加的水溶液的量:10 mL 方法:2 μL BAPTA, AM stock solution +10 mL PBS等水溶液 例2) 25 μM,使用5 μL 50 mM BAPTA, AM stock solution 再添加的DMSO量:95 μL(DMSO最终浓度:1%) 添加的水溶液的量:10 mL 方法:(1) 5 μL BAPTA, AM stock solution + 95 μL DMSO (2) 10 mL PBS等水溶液 + 100μL 的(1) 关于细胞的量,不同的细胞使用不同的细胞量。一般来说,Fura-2, AM及Fluo-3, AM一样的量*。 论文里面有如下的条件,请参考。 例1) 1.75×10-4 cells/cm2,25 μM BAPTA, AM 培养时间:20~60 分钟 * 如果培养时间太长的话,很多BAPTA, AM进入细胞内,对细胞不好(毒性高)。 |
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