限制性内切酶PaqCI®

• AarI 的同裂酶
• 用于 Golden Gate 组装
• IIS 型限制性内切酶能识别非回文 DNA 序列，并在识别序列之外进行切割
• 酶切需要两个或两个以上识别位点。随附 PaqCI 活化剂，以改善酶切效果
• PaqCI 在 Golden Gate 组装中的使用指南
• 限制性内切酶酶切位点：CACCTGC(4/8)
• 查看 NEB Inspired 博客文章，了解如何使用 PaqCI 组装超过 20 个片段

PaqCI 可以完全酶切并且不会出现星号活性

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自 Paucibacter Aquatile 并经修饰的 PaqCI 基因。

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内酶切 1 µg λ DNA 所需的酶量。

  反应条件

  1X rCutSmart™ 缓冲液
  Supplement with 1X PaqCI 活化剂
  Incubate at 37℃

  1X rCutSmart™ 缓冲液
  50 mM Potassium Acetate
  20 mM Tris-acetate
  10 mM Magnesium Acetate
  100 µg/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer™ r1.1: 10%
  NEBuffer™ r2.1: 100%
  NEBuffer™ r3.1: 10%
  rCutSmart™ Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 B

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  300 mM NaCl
  1 mM DTT
  500 µg/ml BSA
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  65℃ for 20 minutes

  甲基化敏感性

  dam 甲基化: 不敏感
  dcm 甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 甲基化与酶切位点重叠影响酶切

  同裂酶

  AarI
  

• 注意事项
  1. PaqCI 是 AarI 的完全同裂酶。
  2. CpG 甲基化影响酶切。更多相关信息，请查看“Dam-Dcm 和 CpG 甲基化”。
  3. PaqCI 完全酶切需要多个识别位点。因此，NEB 随酶提供“PaqCI 活化剂”，可以按 1:1 的比例添加到反应中（例如，1 ul 酶添加 1 ul 的 PaqCI 活化剂）。请注意，对于 Golden Gate 组装反应，PaqCI 活化剂的用量取决于组装的片段数量。
  4. 延时酶切、高酶浓度或甘油浓度 >5% 条件下可能出现星号活性