增强型BCA蛋白定量试剂盒

Enhanced Bicinchoninic Acid Kit for Protein Determination

货号                   组份A        组份B       组份C       BSA标准品            规格

PD-BCA-E2        63 ml         60 ml         3 ml        1 X 1 ml           可供120个试管， 或8块96孔板测试用。

PD-BCA-E          250 ml      240 ml       12 ml        4 X 1 ml          可供480个试管，或32块96孔板测试用。

BSA标准品为5 mg/ml BSA，溶于水中，含0.05%叠azide氮钠。

室温运输和储存。如因温度低或长时间放置出现沉淀，将其摇匀即可使用。BSA标准品保存在-20度，如出现微生物污染则应丢弃。

BCA蛋白定量试剂盒技术背景与原理详解

BCA（Bicinchoninic Acid，二喹啉甲酸）蛋白定量法是一种基于铜离子氧化还原反应的比色检测技术，其核心技术原理涉及蛋白质的还原特性与铜离子的配位化学。该方法通过巧妙的反应设计，实现了对蛋白质浓度的高灵敏度、高特异性检测，现已成为生命科学领域最常用的蛋白定量方法之一。

BCA法的检测原理建立在两个关键化学反应的基础上：

**阶段：蛋白质介导的铜离子还原

在碱性环境（pH 11-12）下，蛋白质分子中的特定结构能够将二价铜离子（Cu²⁺）还原为一价铜离子（Cu⁺）。这一还原过程主要依赖于蛋白质中的两类结构：

肽键骨架：在强碱条件下，蛋白质主链的肽键氮原子能够提供电子，参与铜离子还原。

还原性氨基酸侧链：半胱氨酸（Cys）的巯基（-SH）、色氨酸（Trp）的吲哚环、酪氨酸（Tyr）的酚羟基等具有强还原性的氨基酸残基，能够高效地将Cu²⁺还原为Cu⁺。

**阶段：BCA-Cu⁺螯合物的形成

还原生成的Cu⁺立即与溶液中的BCA分子形成稳定的2:1螯合物（每个Cu⁺离子与两个BCA分子配位）。这种复合物具有独特的电子结构，其最高占据分子轨道（HOMO）与最低未占分子轨道（LUMO）之间的电子跃迁在562 nm处产生强吸收峰，呈现典型的紫红色。值得注意的是，该复合物的摩尔消光系数高达7,000-15,000 M⁻¹cm⁻¹，这是BCA法高灵敏度的结构基础。

 BCA法的显色动力学呈现典型的两阶段特征：快速起始期（0-5分钟，由游离氨基酸主导）和缓慢平台期（5-30分钟，由肽键主导）。通过调节孵育温度（37℃或60℃）可以加速反应达到平衡。研究发现，在60℃下反应5分钟即可达到37℃30分钟的显色强度，这归因于阿伦尼乌斯定律描述的温度-反应速率关系。

BCA法的检测灵敏度直接取决于两个分子特性：

蛋白质还原当量

不同蛋白质的BCA反应性存在显著差异，这主要取决于其"还原当量"（Reducing Equivalent）——即单位质量蛋白质能够还原的Cu²⁺摩尔数。例如：

牛血清白蛋白（BSA）：每分子含21个还原性氨基酸（6Cys+11Tyr+4Trp），还原当量为0.85

溶菌酶：每分子仅含8个还原性氨基酸（8Cys+3Tyr+6Trp），还原当量为0.62

这种差异导致不同蛋白质的标准曲线斜率可能相差达30%，因此**定量时必须使用同源标准品。

尽管BCA法具有诸多优势，但仍存在一些本质性局限：

高浓度还原剂（如DTT>5mM）会直接还原Cu²⁺，导致假阳性。

不同蛋白类型的响应差异。

本产品仅供研究使用。